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回答菌種保存的方法有斜面低溫保藏法、液體石蠟覆蓋保藏法、沙土保藏法、濾紙保藏法、甘油管保存法、冷凍干燥保存法。1、斜面低溫保藏法：將菌種接種到適合的固體斜面培養(yǎng)基上，用油紙將棉塞部分包扎好，然后轉移至2-8℃的冰箱中進行保存。2、液體石蠟覆蓋保藏法：使用液體石蠟將斜面菌覆蓋住，使其和空氣隔絕。

一、菌種保存的方法有哪些

1、斜面低溫保藏法

（1）將菌種接種到適合的固體斜面培養(yǎng)基上，等到菌種充分生長過后，使用油紙將棉塞部分包扎好，然后轉移至2-8℃的冰箱中進行保存。

（2）如果是霉菌、放線菌及有芽孢的細菌，一般可以保存2-4個月左右，需要移種一次。如果是酵母菌，一般可以保存2個月左右，需要每個月移種一次。

2、液體石蠟覆蓋保藏法

（1）將液體石蠟裝在三角燒瓶中，并使用棉塞塞好，用牛皮紙進行包扎，然后在0.1MPa，121.3℃的環(huán)境下滅菌30分鐘左右，接著將其放置在40℃的溫箱之中，將水汽蒸發(fā)掉。

（2）將需要保藏的菌種，用適合的斜面培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，得到健壯的孢子或者是菌體。

（3）使用滅菌過的吸管將液體石蠟吸出，注入斜面上，用量為高出斜面頂端1cm左右為宜。

（4）將試管直立，放置在低溫或者是室溫之下進行保存。

（5）霉菌、放線菌、芽孢細菌可以保藏2年以上不死，酵母菌可以保藏1-2年，一般無芽孢細菌可以保藏1年，腦膜炎球菌可以保藏3個月左右（37℃環(huán)境下）。

3、沙土保藏法

（1）準備好河沙，加入10%稀鹽酸，然后加熱煮沸30分鐘左右，將里面的有機質(zhì)去掉，然后將酸水倒掉，用自來沖洗至ph為中性，接著烘干，過篩（40目篩子），去掉粗顆粒。

（2）準備好非耕作層的不含腐植質(zhì)的瘦黃土或紅土，浸泡洗滌數(shù)次，直至ph為中性，然后烘干，碾碎，過篩（100目篩子），去掉粗顆粒。

（3）將沙和土按照2：1的比例混合，裝入試管或者是安瓿管中，塞好棉塞，在1212℃的環(huán)境下滅菌30分鐘左右。

（4）將菌種在斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得到健壯的菌體，然后向斜面培養(yǎng)物中注入3-5ml無菌水，洗下細胞或孢子制成菌懸液。

（5）使用滅菌過的吸管吸取菌懸液，然后均勻滴入沙土管中（0.2-0.5ml/管）。如果是放線菌或霉菌，可以直接挑取孢子拌入沙土管中。

（6）真空抽去沙土管中的水分。

（7）將沙土管用火焰熔封，然后存放在低溫(4-6℃)干燥處保藏，或者是將沙土管用牛皮紙或塑料紙包好，放置在干燥器內(nèi)保存。保存期間，每隔6個月左右檢查一次菌種存活性。

4、濾紙保藏法

（1）準備好濾紙條（0.5×1.2cm），安瓿管（0.6×8cm），然后每個安瓿管放置1-2張濾紙條，塞上棉塞，在0.1MPa，121℃的環(huán)境下滅菌30分鐘左右。

（2）將菌種在適合的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到健壯的菌體。

（3）在滅菌培養(yǎng)皿中滴加1-2ml的滅菌脫脂牛乳，并取數(shù)環(huán)菌苔在牛乳內(nèi)混合均勻，制成濃懸液，然后使用鑷子從安瓿管中取出濾紙條，浸入菌懸液中，吸飽后，放回安瓿管中，塞上棉塞。

（4）將安瓿管放入干燥器中（內(nèi)有五氧化二磷作吸水劑），并用真空泵抽氣至干。

（5）將棉花塞入管內(nèi)，用火焰熔封，然后放置在低溫環(huán)境下保存。

5、甘油管保存法

（1）準備好80%的甘油，然后進行高壓蒸汽滅菌處理。

（2）將菌種在適合的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，并使用無菌水注入，制成成高濃度的菌懸液。

（3）取出1ml的甘油和菌液混合均勻，讓甘油的濃度變?yōu)?0-30%左右，然后放置在零下70℃的環(huán)境下進行保存。

6、冷凍干燥保存法

在低溫下快速凍結細胞，然后在真空條件下進行干燥，讓微生物的生長和酶活動停止，同時為了保證細胞在冷凍和水分升華的過程中不受損害，應當使用保護劑來制備細胞細胞懸液（菌在凍結和脫水過程中起到保護作用的溶質(zhì)），通過氫鍵和離子鍵對水和細胞所產(chǎn)生的親和力來穩(wěn)定細胞成分的構型。

二、菌種傳代操作規(guī)程

1、點燃酒精燈，在火焰旁的上方灼燒接種環(huán)。

2、將原有的菌種斜面培養(yǎng)基（菌種管）和待接種的新斜面培養(yǎng)基（接種管）用左手的拇指、食指和中指夾住，菌種管在前，接種管在后，然后斜持試管（45°），讓試管內(nèi)斜面向上，兩個試管的口子平齊。

3、右手在火焰旁邊轉動兩管的棉塞，然后右手拿著接種環(huán)的柄端，垂直將接種環(huán)在火焰上灼燒，頂端的環(huán)必須燒紅，而且凡是接種時進入試管的部分，均應通過火焰灼燒。

4、使用右手的小指和手掌之間以及無名指和小指之間，將兩管的棉塞拔出，拿住，然后將試管在火焰上通過。

5、將接種環(huán)插入菌種管內(nèi)，接觸無菌苔生長的培養(yǎng)基，待冷后，從斜面上挑取少許菌苔，然后迅速插入接種管，在斜面上輕輕劃線接種（由下而上劃直線，然后由下往上劃曲線）。

6、接種完畢后，將管口通過火焰滅菌，并將棉塞塞上。