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　　非洲豬瘟病毒，根據(jù)其致病力的不同，可分為高致病性、中等致病性和低致病性三類。高致病性毒株能造成嚴(yán)重的急性病癥，并在感染后4-15天達(dá)到90-100%的死亡率;中等毒性的毒株死亡率在30-70%;低致病性毒株的死亡率在10-30%。

　　中低等級感染后存活下來的豬只是否長期帶豬并向外界排毒，這是長期爭論的焦點。德國弗里德里?！だ辗蚶昭芯吭涸\斷病毒所的研究人員贈出了自己的實驗結(jié)論。

　　一

　　實驗設(shè)計

　　實驗中，研究人員選取了36頭非瘟病毒檢測陰性、非瘟抗體檢測陰性的5-6月豬，其中30頭作為攻毒豬，用分離于荷蘭的中等毒性的 Netherlands’86 毒株通過病毒培育上清液滴鼻的方式進(jìn)行接種感染，稱為C型豬。C型豬隨機分為三組，每組10頭，分辭關(guān)在一個豬舍三個孤立的大欄中。

　　剩余6頭不接種病毒，用于在C型豬感染后期與其同欄飼養(yǎng)，檢測感染后期C型豬的感染能力，稱為S型豬。

　　感染后，C型豬每天檢測直腸溫度并察看臨床現(xiàn)象。要是溫度兩天以上達(dá)到40度，則確以為發(fā)燒。臨床觀測癥狀包括：活躍度、耐受度、呼吸頻率、步態(tài)、皮膚、眼睛、臉頰和采食量等，并建立評分系統(tǒng)。

　　為寥繢判感染后豬只病毒血癥、排毒和免疫應(yīng)答的程度，在感染第3，7，10，14，20，29，42，48，63和91天抽取前腔靜脈血進(jìn)行化驗。

　　同一光陰，為了檢測感染豬只排毒情況，用棉簽拭子收集包括糞便樣品、唾液和口咽部樣品在內(nèi)的拭子樣品，用作qPCR檢測。從105天到126天，拭子樣品每周收集一次。

　　99天后，幸存的19頭C型豬與6頭S型豬混養(yǎng)，每組放2頭S型豬，并按原本實驗設(shè)計收集各類檢測樣品。164/165天后，所有存活的C型豬和S型豬解剖采集組織樣品檢測，包括：扁桃體、唾液腺、脾臟、肺臟和下頜淋巴結(jié)，和腹股溝、肝、腎、腸胃、肺等多處淋巴結(jié)。

　　所有拭子樣品、血液樣品和組織樣品中病毒的都要用實時定量PCR檢測，抗體用ELISA檢測。為了檢測血液和組織中有活性的病毒，應(yīng)用血細(xì)胞吸附實驗檢測。

　　二

　　實驗結(jié)果

　　1

　　臨床癥狀

　　中等毒性的 Netherlands’86毒株感染后的C型豬表現(xiàn)出多種不同臨床癥狀，包括急性致死、延遲致死、慢性病癥，和最終恢重等。

　　多數(shù)豬只在感染4-6天，浮現(xiàn)發(fā)燒癥狀。在急性死亡的豬只身上，臨床癥狀表現(xiàn)為萎靡不振、結(jié)膜炎、不采食、便秘、皮膚變紅，尤其在耳朵和眼睛區(qū)域;發(fā)燒41.8℃，一些豬在高燒5天后浮現(xiàn)中樞神經(jīng)障礙癥狀。急性癥狀均勻持續(xù)8-10天。該階段死亡的豬，解剖發(fā)明多個臟器出血：外周淋巴結(jié)腫脹和出血，腎臟出血點和肺部水腫。

　　2

　　病毒檢測

　　所有30頭C型豬在滴鼻感染一段光陰后，抽血做qPCR檢測都檢出陽性，首席次檢測出陽性的光陰在感染后3-21天之間。在第10和14天，血液中病毒含量最大。在感染第42天，6頭C型豬首席次qPCR檢測結(jié)果呈陰性，第48天7頭，第63天10頭結(jié)果陰性。到了第91天，盡管52%的C型豬依然陽性，但病毒載量降低了(Cq 28-30)。

　　同光陰的30頭C型豬血樣HAT檢測(HAT檢測陽性說明ASFV有感染活性)發(fā)明，血清HAT檢測結(jié)果與血液PCR結(jié)果一致，大多數(shù)HAT檢測陽性結(jié)果浮現(xiàn)在14天感染。有趣的是，HAT首席例陰性結(jié)果浮現(xiàn)在29天，隨后大量存活的C型豬浮現(xiàn)HAT陰性，到了第63天所有存活的C型豬檢測陰性。這約摸表明存活的非瘟感染豬喪失感染能力要早于核酸檢測陰性結(jié)果浮現(xiàn)。

　　棉簽拭子采樣檢測結(jié)果顯示感染ASFV的C型豬排毒情況?？谇皇米訕悠穛PCR檢測在感染第3天浮現(xiàn)陽性結(jié)果(兩頭豬)。在第7和10天，絕大多數(shù)的口腔拭子樣蒲獪現(xiàn)陽性(Cq在30-41間)。從第14天開始，陽性拭子樣品數(shù)量開始減少，到第21和29天，惟獨1個樣蒲崾現(xiàn)陽性，到了第42天，所有的口腔拭子樣蒲崾現(xiàn)陰性。唾液樣品與口腔拭子結(jié)果一致，在7-10天浮現(xiàn)陽性結(jié)果高峰，在14天開始減少。不同的是，唾液樣品病毒載量更多，持續(xù)光陰更長。糞便樣品中的病毒含量更低，最后的陽性樣浮現(xiàn)在第29天。

　　ELISA檢測感染豬抗體情況。首席批可疑結(jié)果(5頭)和陽性結(jié)果(13頭)在感染后第13天浮現(xiàn)，隨后抗體陽性豬數(shù)量和抗體阻斷率穩(wěn)定增添(增大)。到了第29天，所有C型豬抗體顯示陽性(阻斷率在74-98%)，到了第63天，所有C型豬阻斷率達(dá)到99-100%。存活的C型豬直到實驗結(jié)束仍表現(xiàn)陽性，但是產(chǎn)生的抗體是ASFV p73蛋白特異性的抗體，但不能產(chǎn)生有中和作用的抗體。

　　6頭S型豬從實驗開始至結(jié)束，未表現(xiàn)非瘟感染臨床癥狀，qPCR檢測、HAT檢測和ELISA檢測結(jié)果均呈陰性，表明在第99天，S型豬和感染非瘟后存活C型豬混養(yǎng)，C型豬已不具備感染能力。

　　綜上，中等毒性的Netherlands’86毒株感染后的豬只在4-6天內(nèi)既浮現(xiàn)臨床癥狀，并且嚴(yán)重程度各異，包括急性致死、延遲致死、慢性病癥，和最終恢重等。在感染幾天(最早3天)后便浮現(xiàn)病毒血癥，可通過PCR、HAT試驗等主意檢測，同時開始浮現(xiàn)排毒，第3天口腔及唾液中就可檢測病毒，糞便中稍晚;ASFV抗體(p73特異性抗體)浮現(xiàn)更晚。然而存活下來的感染豬只并不會長期帶毒，而是隨著光陰的推移，病毒載量逐漸降低，并最后盡全清除。HAT試驗陰性結(jié)果最先浮現(xiàn)，隨后qPCR結(jié)果也將轉(zhuǎn)為陰性，健康豬只與感染99天后的存活感染豬混養(yǎng)也不會浮現(xiàn)感染。但存活下來的感染豬并不會產(chǎn)生有效的中和抗體。